Cultura de bactérias em soluções feitas a partir de uma ampla variedade de sódio (NaCl) concentrações lhe dará uma boa idéia da concentração ideal dos organismos necessita para o crescimento. Concentração do soluto interno das células determinar qual é a solução isotónica. Taxa máxima de crescimento ocorre na solução mais isotônica, com taxa de crescimento diminuindo em ambas as soluções hipertônica e hipotônicas.

Instruções

NaCl Concentração

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Escolha uma variedade de concentrações de NaCl para começar: sem sal, 0,5 molaridade (M), 1.0M, 1.5M, 2.0M. Adicione um conjunto separado de tubos de diluição para cada concentração de NaCl. Você também vai precisar de um conjunto separado de placas de Petri agar nutriente para cada concentração de NaCl.

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Configure os tubos de diluição na concentração de NaCl 0,5M. Dispensar 9 ml de solução 0,5 M de NaCl em cada um dos 5 tubos de diluição. Rotular os tubos de 10 ^ 1, 10 ^ 2, todo o caminho até 10 ^ 5. Transferir 1 ml da fase log de células de E. coli para o tubo de 10 ^ 1. Vortex a mistura. Transferir 1 ml a partir da 10 ^ 1 para o tubo 10 ^ 2. Vortex a mistura. Continue esse processo até o tubo de 10 ^ 5.

Repita esse procedimento para cada concentração de NaCl.

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Placa cada conjunto de tubos sobre as placas de agar nutriente na concentração correcta. Dispensar 1 ml de 0,5 M de NaCl tubo de 10 ^ 1, numa placa de petri de agar nutriente marcado "10 ^ 1, 0,5 M de NaCl). Descartar o tubo. Repartir 1 ml de 0,5 M de NaCl tubo de 10 ^ 2, para um nutriente placa de petri de agar marcado "10 ^ 2, 0,5 M de NaCl). Use uma espátula estéril para espalhar amostra uniformemente sobre a mídia solidificada. Continue esse procedimento para 10 ^ 5.

Repetir a todas as concentrações de NaCl.

Incubar as placas

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Tome as placas e transformá-los de cabeça para baixo (para a mídia na placa é voltada para cima). De acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS), a E. coli tem uma temperatura óptima de 37 graus Celsius crescimento. Incubar durante 24 a 48 horas até a observação de crescimento de colônias.

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A incubadora deve permanecer um estável 37 graus Celsius durante todo o experimento, como a variação de temperatura podem afectar os resultados.

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Retirar as placas do incubador após 48 horas.

Enumeração de Colônias

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Depois de ter terminado placas de incubação, organizar todas as placas por concentração de NaCl. Encontre a diluição (10 ^ 1 a 10 ^ 5) que contém 25 a 250 colónias por placa. Esta é a contagem ideal para enumerar as bactérias em uma placa.

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Contar as colónias e compare as concentrações de NaCl. O conjunto de placas que tem o maior número de colónias é mais próxima da concentração de NaCl óptima.

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Se você deseja uma estimativa mais próxima da concentração de NaCl óptima para o crescimento, repetir o experimento com concentrações de NaCl ao redor do que você encontrou para ter o melhor crescimento (por exemplo, se maior crescimento foi encontrado em 0,5 M, escolha concentrações de 0,3M, 0,4M , 0,5 M, 0,6 M e 0,7 M para repetir a experiência).

Dicas:

• E. coli pode ser potencialmente perigoso se não for tratada adequadamente. Não faça experiências com a O157: H7 variedade.